伏馬**(Fumonisins)是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的****，目前已知有28種衍生物，其中以伏馬**B1（FB1）*為普遍，研究也*為深入，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)玉米及其制品，如動物飼料均易被FB1造成污染。FB1毒性在伏馬**中*強(qiáng)，對多種動物有較嚴(yán)重的毒理作用。研究表明FB1可引發(fā)馬的白腦軟化癥，豬的肺水腫綜合癥，此外，還可誘發(fā)人類的食道癌和肝癌、胃癌等**，對畜牧業(yè)和人類的健康構(gòu)成危害。

試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的伏馬**B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗伏馬**B1抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含伏馬**B1含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較乘以樣本稀釋倍數(shù)即可得出樣本中伏馬**B1的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度：0.5ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min

2.3 檢測下限：

玉米、飼料…………………………50ppb

2.4 交叉反應(yīng)率：

伏馬**B1…………………………100%

2.5 樣本回收率：

飼料…………………………………95%±15%

玉米…………………………………100±15%

伏馬**B1檢測試劑盒【試劑盒組成】

序號	名稱	規(guī)格（96T×1）	規(guī)格（96T×2）
1	酶標(biāo)板	96T×1	96T×2
2	酶標(biāo)記物 (紅蓋)	11ml×1	11ml×2
3	抗體工作液 (藍(lán)蓋)	5.5ml×1	11ml×1
4	20X濃縮洗滌液	40ml×1	40ml×1
5	底物液A (白蓋)	6ml×1	11ml×1
6	底物液B (黑蓋)	6ml×1	11ml×1
7	終止液 (黃蓋)	6ml×1	11ml×1
8	陽性對照 (紅蓋)	1.0 ml×1	1.5 ml×1
9	陰性對照 (綠蓋)	1.0 ml×1	1.5 ml×1
10	蓋板膜	1張	2張
11	自封袋	1個	1個
12	說明書	1份	1份

伏馬**B1檢測試劑盒4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：單道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道300μl
4.3 試劑：甲醇
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
5.2 配液：
配液1：樣本提取液
70%甲醇，即V甲醇:V去離子水=7：3。
配液2：復(fù)溶液
將10×濃縮復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋，即：V（10×濃縮復(fù)溶液）:V（去離子水）=1:9，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 玉米、飼料處理方法
1）稱取1g粉碎樣品于50ml離心管中，加5ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；
2）取上清0.1ml，加入1.9ml復(fù)溶液，振蕩2分鐘；
3）取50μl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù)：100 伏馬**B1檢測試劑盒檢測下限：50ppb
（若樣本中伏馬**B1的含量較高，可在步驟2）按比例增大稀釋倍數(shù)，檢測出的含量乘以樣本實際的稀釋倍數(shù)即為樣本中的含量）
6 酶聯(lián)**試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
實驗開始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 顯色：每孔加入底物液A 50μl，再加底物液B 50μl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。
6.5 終止：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6.6 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝
A
×100%
A0
伏馬**B1檢測試劑盒A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索取）
8 注意事項
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍。
保質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。